肺癌免疫组化检测可以对肿瘤预后的标志物进行表述。肿瘤标志物是病理学研究的热点之一,当前所涉及的肿瘤标志物种类繁杂,方法多样,结果不一。既然如此,下面就请北京伟达中医肿瘤医院的郑伟达教授给大家好好介绍一下肺癌免疫组化检测,希望可以帮助到更多的人。
以下为大家详细介绍有关肺癌免疫组化检测的问题:
NE标记的选择及其表达
尽管研究NE分化的方法很多,如电镜、IHC、生化测定NE相关的酶及分子生物学通过原位杂交检测编码NE标记的mRNA的表达,但是IHC仍然是研究NE分化广泛应用的手段。NE标记可分为共同NE标记与细胞特异性标记。共同NE标记有胞质标记、小囊泡相关标记、分泌颗粒相关标记及胞膜标记。这些NE共同标记并非依赖于肿瘤分泌的激素而存在,往往是诊断肿瘤NE表型的第一步,特别是那些不产生和/或分泌激素的肿瘤。细胞特异性标记主要是一些多肽和生物活性胺,它们可以引起特征性的副癌综合症,另一方面也可作为丝裂原或自分泌生长因子促进肿瘤的生长与细胞的分裂。虽然存在如此众多的标记抗原,并且IHC本身技术也不断革新,但一方面抗原或因含量甚微或因以较大的前体分子出现如多肽类激素,使针对这些抗原的抗体敏感性受限,另一方面也因抗原交叉反应使抗体的特异性不够理想。Gosney的研究显示SYN和CGA具有较高的特异性与敏感性,Addis在其述评中补充Leu-7可能是其次的选择,但不久会被针对NCAM或其它抗原的抗体取代。正因如此,本研究选择上述三种标记CGA、SYN、NCAM运用较敏感的LSAB法研究它们在NSCLC中的表达。
嗜铬蛋白是一组分子量大小不同的的酸性可溶性蛋白,构成DCG的基质,伴随NE多肽激素出细胞。CGA仅是其中之一,由439个氨基酸组成,其编码基因位于14号染色体。有研究显示CGA的表达与DCG的出现具有一致性,本实验应用单克隆DAK-A3鼠抗,抗原来源于CGA羧基端20kDa的片段,发现11.04%的NSCLC有表达,与文献报道的2?17%大致相仿〔3~7〕。SYN是分子量为38KDa的结合膜糖蛋白,为神经元突触前囊泡和正常NE细胞或NE肿瘤细胞的小透明囊泡的成分。由于单克抗隆抗体在2~4小时福尔马林固定的标本中免疫反应明显降低,因此本实验选择SYN的多克隆抗体,为生物合成的人SYN的兔多抗。其表达于38.65%的NSCLC,低于Loy的62%,而比Schleusener的24.3%,Carles与Sundaresan的23%及Graziano的11.2%要高。NCAM属于免疫球蛋白超级家族,是一组密切相关的唾液酸糖蛋白,介导同嗜细胞粘附,在胚胎组织发育过程中起作用。其仅由一个基因编码,定位于11q23,至少有24个外显子组成,通过mRNA剪接产生不同异构体,分子大小取决于羧基端的长度。免疫斑点试验发现NCAM有3种主要异构体NCAM?A、B、C,分子量大小分别为190Kda、135Kda、115Kda,NCAM-A与NCAM-B是跨膜糖蛋白,具有不同长度的细胞浆尾巴,而NCAM-C通过糖基脂酰肌醇锚着于细胞膜。NCAM分子的细胞外部分含有5个免疫球蛋白样结构域及2个纤维连接蛋白Ⅲ型同源重复片段,后者连接于胞膜\干区\,根据其所含α-(2,8)多聚唾液酸单位的多少,分为高唾液酸化的NCAM-H型,与低唾液酸化的NCAM-L型,高唾液酸化可形成碳水化合物屏障,减少接触介导作用,降低细胞粘附力,可能与肿瘤的侵袭行为有关。NCAM在肺癌中表达与肿瘤的NE分化表型相关,大部分研究者均选用Leu-7单抗,事实上Leu-7单抗仅识别NCAM的糖基表位,特异性不高,因此本实验选择能识别NCAM多肽表位的123C3鼠单抗,定性研究NCAM在NSCLC中的表达,其抗原来源于新鲜SCLC标本的胞膜成分,发现有24.54%的NSCLC表达NCAM,与文献报道一致。NCAM正常的免疫反应为胞膜呈现特异性染色颗粒,但本实验发现NCAM的IHC染色尚出现胞浆染色,推测可能是NCAM转运至胞膜的过程有障碍,或NCAM的糖基唾液酸化过程障碍,从而导致蛋白的异位储积。精确的抗原定位有待于超微免疫组化技术。
NE标记表达的相关性与NE分化
尽管文献报道CGA、SYN、NCAM是一组特异性和敏感性较好的NE分化共同标记,并且本研究结果也显示无论是CGA与SYN、CGA与NCAM还是SYN与NCAM之间的表达具有相关性,但是它们的表达并非完全一致,SYN的表达高于NCAM,高于CGA,仅7例NSCLC同时3种NE标记均表达,竟然有40例仅表达1种NE标记,其中CGA2例,SYN28例,NCAM10例。说明任何一种NE标记都不是NE分化诊断的完美标记,不能以某一种标记的表达与否作出NSCLC的NE分化标准。在CGA表达的NSCLC中,有88.89%(16/18)与其他两种标记同时表达,而SYN为55.56%(35/63),NCAM为75.00%(30/40),推测可能CGA的特异性较好,而SYN的敏感性较好。细胞分化是细胞特异性基因组共同协调表达的结果,如此肿瘤存在NE分化应有多种NE分化标记同时表达,因此我们认为应该选择一组NE共同标记联合检测NE分化,CGA、SYN、NCAM可能是目前三种基本的NE标记,并定义两种标记同时表达为NE分化,如此定义有22.70%的NSCLC伴NE分化。
NE分化与组织学类型
不同组织学类型的NSCLC出现NE分化的比例不同,腺癌高于腺鳞癌、鳞癌、大细胞癌,本研究分别为40.32%、19.05%、10.53%与0.00%,就其原因尚不明确。有研究显示C-src基因表达与SCLC的NE分化有关,是否不同类型的NSCLC也存在C-src基因表达上的差异,有待进一步研究。但也有不同组织类型伴NE分化无差异的报道。
选择3种NE标记可以检测出NSCLC的NE分化,但不能以某一种标记的表达与否作为NSCLC的NE分化诊断,应联合检测以至少2种标记表达定义为NE分化,在不同类型的NSCLC中腺癌更易出现NE分化。从肿瘤的NE分化特征来看,SCLC与NSCLC具有共同的细胞起源,可能来自具有多潜能分化特征的支气管上皮干细胞,伴NE分化的NSCLC可从属于肺神经内分泌肿瘤。
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