【摘要】  胰腺癌是常见的消化道恶性肿瘤之一。目前，胰腺癌的有效治疗方法仍然是以外科手术为主，放射治疗及化学治疗为辅的综合治疗。随着免疫和分子生物学在肿瘤发生、发展和转移机制等方面研究的不断深入，胰腺癌的基因治疗及免疫治疗成为可能，并成为治疗胰腺癌的新的发展方向和热点。

     胰腺癌是消化系统具有高度恶性的肿瘤，严重威胁人类健康，在美国已成为第二大消化道肿瘤的死因[1]，在我国也有逐年上升趋势。胰腺癌早期诊断困难，手术切除率低，预后差， 5年生存率仍提高不多[2-3]，85%的患者在诊断后12月内死亡[4]，所以积极寻找治疗胰腺癌的新方法成为当务之急。近年来兴起的免疫基因治疗方法不失为人类攻克胰腺癌提供了有力武器。目前基因治疗主要包括：自杀基因治疗（基因前药物激活）、替换抑癌基因治疗、反义基因治疗、受体基因治疗以及免疫基因治疗等。本文仅就免疫基因在治疗胰腺癌中的作用作一综述。

    1  免疫基因治疗的原理

    大量研究表明机体抗肿瘤免疫反应主要是细胞免疫过程[5]。免疫基因治疗就是将各种细胞因子基因导入肿瘤或其他免疫效应细胞，使其在机体表达分泌细胞因子或利用其他基因分子增强肿瘤细胞的免疫原性或免疫系统功能，以加速肿瘤消退的方法。

    免疫基因治疗肿瘤策略的制定是基于：①肿瘤细胞之所以能够逃避宿主的免疫监视系统，是由于肿瘤细胞免疫原性很低，MHCⅠ型抗原表达水平太低，因而不能被视为异己。②辅助T细胞不能有效地产生各种细胞因子，而不是各种效应细胞丧失了功能。③肿瘤浸润淋巴细胞或本身具有抗原呈递功能的肿瘤细胞作为载体细胞，可以有效地诱导产生较强的局部免疫反应。

    从基因转染的靶细胞来说可以将外源基因导入肿瘤细胞，也可以导入免疫细胞。如果将细胞因子(如IL?鄄1，IL?鄄2，IFN及CSF等)导入肿瘤细胞，可以使表达细胞因子的肿瘤细胞对机体免疫系统产生较强的免疫刺激作用。将细胞因子直接导入免疫细胞，可以直接调整细胞介导免疫功能而杀伤肿瘤。因此，如何由载体将免疫基因高效、安全、特异地转染至靶细胞是基因治疗的关键。目前常用的载体有病毒载体和非病毒载体两种，病毒载体包括逆转录载体和腺病毒载体等，是基础实验和临床研究中广泛使用的载体系统。

    构建好的重组病毒载体经体外包装后得到病毒，用于感染真核细胞，能高效地将外源基因整合到宿主细胞基因组，并随细胞分裂而传代[6]。非病毒载体有脂质体等。脂质体是用人工方法将磷脂在水溶液中形成一种脂质双层包围水溶液的脂质微球。脂质分子在水溶液中形成脂质微球时，可将生物大分子(如酶、抗体及核酸等)或小分子药物包入脂质微球中，因此它可作为一种运载工具，通过脂质体膜与体细胞的相互作用(包括膜融合、被吞噬等)，把含有特殊功能的生物大分子及小分子药物导入细胞中。脂质体可以携带各种基因片断，保护基因不会被核酸酶降解。通过静脉注射，脂质体可将所携带基因选择性地导入靶细胞中，达到基因治疗目的。两类载体各有其优缺点，可根据实验需要自主选择。

    2  免疫基因治疗的研究

    2．1  一种免疫基因治疗胰腺癌  Clary等[7]将转染IL?鄄2基因的PanCO2胰腺癌细胞植入大鼠体内，一段时间后大鼠获得对PanCO2胰腺癌细胞的免疫力，当再次植入PanCO2细胞时，大鼠荷瘤的形成速度大大降低，瘤体大小只有对照组的40％左右，并且抑瘤时间明显延长；Peace将多种Ras突变多肽免疫C57BL/6小鼠，发现部分多肽有效地诱导特异性T细胞形成，对肿瘤具有细胞特异性杀伤作用。Kubuschok等[8]将含突变型ras基因的EB病毒表达载体转染另一种抗原提呈细胞——淋巴母细胞，制成抗胰腺癌疫苗，结果表明淋巴母细胞同样可以用于肿瘤疫苗的制备，并且通过基因转染制备的疫苗之抗原表达不受MHC的限制。

    普通的全身化疗和放疗副作用极大，而通过单克隆抗体(McAb)与化疗药物、免疫毒素及前药酶等耦联，特异性地导向肿瘤细胞，可以更好地选择性杀死肿瘤细胞。目前许多用于胰腺癌的McAb大多为人鼠嵌合体，如ch2A10，可明显抑制胰腺癌细胞的生长，同时又避免单纯鼠源性抗体引起的超敏反应[9]。

    胰腺癌肿瘤内注射重组人肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)可抑制肿瘤生长，Sato等[10]在胰腺癌细胞系AsPC?鄄1.PANc?鄄1中转染TNF受体R55基因，结果表现出显著高于其母代细胞系的TNF敏感性，联合应用突变型TNF471具有更强的抗肿瘤作用。Sangro等[11]给21例消化道恶性肿瘤患者(其中5例为胰腺癌)瘤内注射腺病毒转载IL?鄄12的病毒颗粒，可使肿瘤缩小而无累积性毒副作用。

    近年来，对树突状细胞（Dentritic Cell，DC）免疫功能的研究是免疫基因治疗胰腺癌的又一大热点，树突状细胞是一种高效的抗原提呈细胞（APC），捕捉并提呈抗原给CD4+ 细胞，在T细胞介导的免疫发应中起重要作用。Schnurr等[12]将胰腺癌细胞提取物载入树突细胞制备抗肿瘤疫苗，结果表明该疫苗能诱导较强的T细胞抗肿瘤免疫反应，无癌期和生存期明显延长。同样，Tang等[13] 将胰腺癌细胞溶解产物致敏DC细胞，然后用携带IL?鄄18基因的重组腺病毒转染DC细胞制成疫苗，对胰腺癌小鼠模型进行接种， 结果发现在DC?鄄IL?鄄18 细胞溶解产物中IL?鄄18和INF?鄄γ比其他组明显升高，抑癌作用显著。国内唐朝晖等[14]利用IL?鄄8和胰腺癌细胞裂解物修饰的树突状细胞疫苗，对胰腺癌荷瘤小鼠有明显的免疫治疗作用。

    2.2  多种免疫基因共转染联合治疗胰腺癌  由于T细胞的激活存在双信号作用机制，即T细胞的有效激活，除需APC提供经加工后形成的主要组织相容性复合体/抗原肽复合物(第一信号)供T细胞受体识别外，还需提供共刺激信号(第二信号)供T细胞表面相应配体识别。有的免疫基因分子在第二信号识别中起重要作用，能活化细胞杀伤功能导致靶细胞(癌细胞)裂解。因此，各种基因联合协同作用，大大加强了机体抗肿瘤效应，弥补了一种免疫基因治疗肿瘤疗效较弱的缺陷。

    如有人联合应用IL?鄄2基因和IFN?鄄γ基因，可使CD4+，CD8+ 细胞及淋巴细胞总数增多，能诱导更强的抗肿瘤免疫反应[15]。Clary等[16]制备分泌多细胞因子的胰腺癌疫苗，经种植联合分泌IL?鄄2和IFN?鄄γ的PanCO2细胞后，绝大部分大鼠都有排斥PanCO2细胞的能力。Marianne[17]联合Ras17肽疫苗和GM?鄄CSF对胰腺癌患者皮下注射，在外周血单核细胞中，能检测到针对k?鄄ras12位(Cys)突变的特异性CD8+ T细胞，能特异性地杀伤含k?鄄ras12位(Cys)的胰腺癌细胞。Gjertsen等[18]用突变ras肽和GM?鄄CSF联合免疫接种胰腺癌细胞患者，结果58%的患者产生了ras肽特异性T细胞，随访发现这种反应存在长期免疫记忆，胰腺癌晚期患者生存期较对照组明显延长。国内有张延龄[19]将反义K?鄄ras质粒转染至有K?鄄ras突变的胰腺癌细胞株，可以减少p21蛋白的产生，从而抑制癌细胞株生长。Jaffee及Boura等分别将GM?鄄CSF及IL?鄄2，IFN?鄄γ基因通过腺病毒转导肿瘤细胞后回输体内，癌细胞转导的细胞因子由于癌灶局部高浓度免疫增强性细胞因子的释放，使肿瘤周围大量细胞浸润，肿瘤生长明显受抑制。Putzer等[20]以腺病毒为载体将IL?鄄12和联合启动子B7.1共同转染荷瘤裸鼠中可产生延迟免疫反应，用此法治疗后，80%的荷瘤鼠肿瘤完全消退。Kimura等[21]研究表明IL?鄄2和IL?鄄4转基因疫苗可诱发抗肿瘤作用，而且作用是特异性的。

    胰腺癌的联合免疫治疗是多方面的，如免疫基因与抑癌基因的联合应用，免疫基因与自杀基因的联合应用等，甚至有人尝试把放射性核素与免疫治疗结合起来，形成独特的放射免疫治疗方法，并取得了一定疗效。

    3  免疫基因治疗胰腺癌的优点及须克服的困难

    免疫基因治疗的优点是显而易见的，治疗过程中无需多次反复全身应用细胞因子，毒副作用小，安全性高，抑癌持久，并可通过多种途径调动机体的免疫反应。目前免疫基因治疗主要停留在动物实验阶段，有些已进入临床Ⅰ，Ⅱ期试验[22]。

    要想在临床上广泛应用，还需克服许多困难，如有效载体的选择、高效安全的转导方法(目前尚无理想的转导系统)及目的基因的选择性表达等，另外，多种细胞因子共转染胰腺癌细胞时，何种细胞因子疗效最佳，尚不能确定，这些问题的解决，有待时日。

    综上所述，胰腺癌的免疫基因治疗虽已取得了可喜的进展，使广大胰腺癌患者看到了光明，但仍有不少困难亟待解决。目前采用的任何一种基因治疗措施都不尽人意，还有许多问题，任何一种单一的手段都不能完全达到理想的治疗效果，研究证实，多种治疗措施联合应用效果明显，因此，可以进一步探讨如何合理地进行联合治疗。人类的智慧是无穷的，在飞速发展的“分子时代”，经世界各国学者们的不懈努力，通过基因治愈肿瘤是大有希望的。