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芦笋对小鼠前胃癌变和3T3细胞生长的影响
http://www.wd999.com 2006-1-19 14:25:47
中山医科大学肿瘤研究所 卢圣贤 蔡海英 李晴雪 提 要：本实验分为体内体外两部分。体内实验证明芦笋对由肌氨酸乙酯亚硝胺诱发的小鼠前胃鳞状上皮癌变具有明显的抑制作用，对照组癌变率为63.0%，芦笋组为26.8%，两组癌变率与胃重比较在统计学上均有显著差异（P<0.01）；形态学观察显示，芦笋不但可以降低癌变率而且可以阻止癌细胞的浸润。体外，芦笋对3T3细胞的生长曲线与分裂指数均有一定的抑制作用，细胞增殖缓慢，但无明显毒性。本文还讨论了芦笋抑制癌变的可能机理。 关键词：芦笋 抗癌作用 小鼠前胃 鳞状细胞癌 3T3细胞 芦笋为百合科植物石刁柏（Asparagus officinalis,L）的块根。祖国医学认为芦笋具有“清肺止渴，解诸肉毒，利水通淋”等作用，国内现用于乳腺小叶性增生的治疗。本文报道芦笋抑制由化学致癌物诱发的小鼠前胃鳞状上皮癌变和对3T3细胞生长分裂的影响。 材料与方法 材料：①肌氨酸乙酯亚硝胺，简称NSEE，由本室合成，并经检验合格；②芦笋汁（100ml汁中含80g鲜芦笋）与矿泉水均由广东省遂溪县芦笋厂提供；③NIH3T3细胞由广州医学院引进；④培养液为MEM。 方法： 1．体内实验：挑选健康NIH小鼠，雌性，体重20-24g，随机分为如下三组：对照组、动物27只，口服灌喂0.25g/kg体重的NSEE，每周2次（共12次），给予正常的饲料与自来水；芦笋组，动物34只，NSEE剂量与使用次数同对照组，使用NSEE同时让动物饮用芦笋汁，每周6次，共14周；矿泉水组，动物30只，NSEE使用同上，使用NSEE同时，让动物饮用矿泉水，每周6次，共14周。使用致癌物NSEE期间每周称重一次，以调整NSEE剂量。实验于110天结束，颈椎脱位处死小鼠，取胃清除洁净内容物，以10%甲醛固定。几天后将胃吸干水份称重，大体检查后认真切取病变部位组织制片，H.E染色。形态学观察，按以往标准分级，I级单纯增生；Ⅱ级癌前病变；Ⅲ级早期癌；Ⅳ级浸润癌；Ⅴ级广泛浸润癌。 2．体外实验：①生长曲线绘制：1.2×104/瓶3T3细胞接种于含20%MEM的25ml培养瓶内。24小时后换成MEM配制的3.1%芦笋液（pH=7.0），作用18小时后于不同时间取出细胞，每次计数两瓶，以计数的平均值绘制生长曲线；②分裂指数：将3T3细胞接种于内有盖玻片的25ml培养瓶内，同上处理，加芦笋液或矿泉水后于不同时间收片，10%甲醛固定，H.E染色。显微镜下计算细胞中期分裂象数目并进行细胞形态学观察，每片计数2000个细胞，以千分率表示分裂指数。 结 果 一、芦笋由对NSEE诱发的小鼠前鳞状上皮癌变的影响。 实验表明，对照组癌变率为63.0 %，芦笋组为26.8%，矿泉水组为56.7%，芦笋组的癌变率和对照组比较在统计学上有显著差异（见附表，P<0.01）。 附表 芦笋对小鼠前胃大体比较 组 别 例数 病变分期例数 总癌变 例数（%） Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 对 照 组 芦 笋 组 矿泉水组 27 34 30 27 34 30 27 32 30 11 9 13 6 4 17（63.0） 9（26.8）.. 17（56.7）. 与对照组比较P>0.05，•P<0.01（X2=8.1794） 二、动物胃重和前胃大体比较 芦笋组胃重（0.25±0.05g）与对照组（0.35±0.13g）比较在统计学上有显著差异（P<0.01）；矿泉水组与对照组比较无显著差异（P>0.05）。以上差异在大体标本中都可以观察到，对照组与矿泉水组的动物前胃粘膜明显增厚变粗，普遍看到绿豆大的粗糙突起，其中对照组有2例0.6g的肿瘤，芦笋组前胃的增厚程度普遍不及以上两组，突起亦小而少。 三、芦笋对3T3细胞毒性和生长分裂的影响芦笋组细胞生长增殖较为缓慢，生长曲线平稳，远不及矿泉水组的细胞生长活跃；在倒置显微镜下经3.1%芦笋液作用的3T3细胞呈标准纤维细胞状态生长，胞核位于中央，胞浆有不规则突起，细胞内均有少量空泡，H.E染色未发现细胞变性或坏死，表明在3.1%浓度时芦笋液对3T3细胞没有明显的毒性作用。芦笋组的3T3细胞中期分裂象的千分率较矿泉水组低，曲线呈平稳态。 讨 论 本研究通过体内外结合的方法，证实了芦笋的抗癌作用。在动物体内实验中，芦笋显著抑制由化学致癌物引起的前胃癌变，对照组癌变率为63.0%，芦笋组为26.8%，统计学上有显著差异（P<0.01）；对照组17例癌变中有6例是浸润癌，芦笋组9例癌变中无1例浸润癌，这说明芦笋不仅可以降纸癌变率，而且可以阻止癌细胞的浸润，其原因可能是由于芦笋提高了小鼠机体免疫力。芦笋的抗癌作用与其成分有关，芦笋中含有天冬酰胺、胡萝卜素、组蛋白和微量元素硒等。天冬酰胺在芦笋中以游离态存在，能对体内恶变细胞形成一种生化障碍，既能防止正常细胞的恶变又使恶变细胞发生营养障碍，从而抑制肿瘤细胞的生长增殖；另外组蛋白有促进生长正常化的作用，硒与胡萝卜素的防癌作用亦被证实。体外实验表明，3.1%芦笋汁对3T3细胞的生长分裂都有强的抑制作用，说明芦笋的抑制癌变可能是通过减缓细胞的分裂增殖来进行的。文献报道，低浓度的芦笋液可促进外周血T淋巴细胞的转化。 李冬华等报导芦笋汁LA-795、CNE、HeLa和Eca-109等细胞系有明显的细胞毒作用，可能与使用的浓度有关；孙瑜等证实芦笋汁对小鼠S180有明显的抑制作用。但芦笋抑制由亚硝胺致癌物诱发的肿瘤尚未见报道。 ——《癌症》，1993，12（1）33-35 芦笋胶囊由中国癌症信息库--全国独家应用销售
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