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芦笋对小鼠细胞免疫机能的影响
http://www.wd999.com 2006-1-19 14:25:47
贵阳医学院病理生理学教研室 植物化学教研室军事医学科学院放射医学研究所 杨勤 庄宗杰 吴锦忠 王玉芝 宁志强 提 要 研究了芦笋原汁、芦笋多糖及芦笋皂甙提取物对C57小鼠细胞免疫机能的影响。结果表明，低剂量原汁在体外可促进小鼠脾淋巴细胞增殖转化；口服芦笋原汁及其多糖、甙类提取物，在体内具有提高NK细胞和LAK细胞活性，增强小鼠脾淋巴细胞增殖转化的作用，其芦笋甙类提取物的作用明显优于原汁和多糖。本研究提示，芦笋及其提取物对小鼠细胞免疫机能的增强作用，是芦笋及其提取物抗癌的重要机制之一。 关键词 芦笋 淋巴细胞转化 自然杀伤细胞 淋巴因子激活的杀伤细胞 植物提取物 芦笋（Asparagus officinalis Linnaeus），又名石刁柏，是一种在世界上广为栽培的植物。有研究发现，芦笋对多种肿瘤细胞具有直接的细胞毒作用并能抑制动物体内可移植性肿瘤的生长，延长生命。但迄今为止，芦笋的有效抑癌成份及其抑癌机制尚未阐明。芦笋对机体免疫系统，特别是细胞免疫系统功能的影响，国内外尚未系统研究报道，本研究旨在观察并比较芦笋及其提取物对小鼠细胞免疫机能的影响。初步探讨芦笋抗肿瘤作用的有效成份及其免疫学机制。 1 材料与方法 1．1 材料 芦笋：黔园一号。由贵州省农科院培植并供给。取新鲜嫩茎制备芦笋原汁及芦笋多糖与皂甙提取物。 实验动物：6~8周龄C57BL/6雄性小鼠，体重18-20g，军事医学科学院实验动物中心提供。 肿瘤细胞系：YAC-1（小鼠淋巴瘤细胞，军科院307医院免疫室提供）；P815（DBA/2小鼠肥大细胞瘤，北京肿瘤研究所惠赠）；两瘤株均在含15%小牛血清的RPMI-1640中培养传代。 试剂：重组人白细胞介素2（rIL-2），（日本盐野株式会社产品）；ConA（sigma）；Na251cro4，3H-TdR（中国原子能研究院产品）；淋巴细胞分离液（上海试剂二厂）。 1．2 方法 1.2.1 芦笋对小鼠脾淋巴细胞体外增殖转化的影响。 实验用芦笋原汁经25µm微孔滤器除菌后，按300µg/ml、30µg/ml、3µg/ml三种浓度分别加入正常小鼠脾淋巴细胞悬液（2×106/ml）中，加入ConA5µg/ml），混匀后，取150µl加入96孔平底培养板，37℃、5%CO2孵育72h，于收获前12h加入3H-TdR0.5µci/well，用多头细胞收集器收集孔内细胞，液内测定cpm值，用刺激指数（SI）表示淋巴细胞转化率。每样本均设三复孔。 实验孔平均cpm SI= 对照孔平均cpm 1．2．2 口服芦笋及其提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖转化率、NK和LAK活性的影响。 实验分四组，每组10只C57小鼠，雌雄各半。（1）正常对照组（C）；（2）芦笋原汁组（A）；（3）芦笋多糖组（G）；（4）芦笋甙组（S）。各组动物分别用生理盐水、芦笋原汁、12.8%芦笋多糖水溶液、25.9%芦笋皂甙水溶液灌胃，每日一次，每次0.2ml，在给药第10天处死小鼠，取脾制备淋巴细胞悬液进行以下检测： A、小鼠脾淋巴细胞增殖转化率的测定：取制备的各组小鼠脾淋巴细胞2×106/ml，按5µg/ml加入ConA混匀后取150µl置96孔平底培养板内培养，测定方法与体外淋巴细胞增殖转化率测定相同。 B、NK细胞活性的测定：以小鼠NK敏感的YAc-1为靶细胞，按4h51cr释放测定NK细胞活性。杀伤率按下式计算。每样本均设三平行孔。 实验组cpm-自发释放cpm 杀伤率（%）= ×100 最大释放cmp-自发释放cmp C、LAK细胞的诱导与活性测定： 取无菌制备的各组小鼠脾淋巴细胞悬液，按2×106cells/well浓度种入24孔细胞培养板内（2ml/well），各孔加入2000单位的rIL-2（1000单位/ml），置37℃，5%CO2孵箱内孵育72h后，收获细胞，洗涤，计数台盼蓝拒染色细胞，取E（效应细胞）：T（靶细胞）=40:1，以P815为靶细胞，用4h51Cr释放法测定LAK活性。每样本均设三平行孔。 2 结果 2．1 芦笋类药物对小鼠脾淋巴细胞体外增殖转化的影响，结果见表1： 由表1可见低浓度芦笋原汁在体外对小鼠脾细胞有明显的促增殖作用，其刺激指数分别为1.744和2.766（P<0.01），高浓度的芦笋原汁则无这种促进 表1 芦笋对小鼠体外脾淋巴细胞增殖的影响 Group n Dose of asparagus （µg/ml） Lymphocyte blastogenesis cpm（X±SD） SI Control 8 — — 1540±121 Asparagus-1 10 300 1469±176 0．954 Asparagus-2 10 30 2868±166（1） 1．744 Asparagus-3 10 3 4260±705（2） 2．766 （1）Compared to the control（C），P<0.001（2）Compared to Asparagus-1，P<0.001 增殖的作用，SI为0.954。 2．2 芦笋在体内对小鼠脾淋巴细胞增殖转化的影响。结果见表2。 由表2可见，各给药组小鼠脾淋巴细胞增殖转化反应均明显高于正常对照组（P<0.05），刺激指数分别为1.315，1.979，2.126，以芦笋皂甙的作用最为明显。 2．3 口服芦笋及其提取物对小鼠淋巴细胞NK活性的影响。 结果见表3。 结果如表3所示，给药组小鼠脾淋巴细胞NK活性在各效/靶比均明显高于相应对照（P<0.01），其中芦笋皂甙在效/靶比为100:1和50:1时，其作用明显优于原汁及多糖（P<0.01）。 表2 芦笋在体内对小鼠脾淋巴细胞增殖转化的影响 Group n Lymphocyte blastogenesis cpm（X±SD） SI Control 10 14661±6338 Asparagus jujce 10 19282±1110（1） 1．315 Polyglucosijde of Asparagus 10 29009±1790（1） 1．979 Saponin of Asparagus 10 31162±1009（2） 2．126 （1）Compared to control(C)，P<0.01 （2）Compared to the(A)，P<0.01 表3 口服芦笋及其提取物对小鼠脾淋巴细胞NK活性的影响 Group n NK activity（%） 100:1 50:1 25:1 Control 10 15.2±1.84 10.7±2.05 4.8±3.39 Asparagus jujce 10 25.9±0.85（1） 15.3±2.33（1） 13.1±2.4（1） Polyglucosijde of Asparagus 10 24.5±2.19（1） 17.9±1.41（1） 14.6±7.14（1） Saponin of Asparagus 10 34.3±0.42（2） 28.7±1.77（2） 16.6±0.07（1） （1）Compared to the control（C），P<0.01；（2）Compared to the A group，P<0.01。 2．4 口服芦笋及其提取物对rIL-2诱导的小鼠脾淋巴细胞LAK活性的影响。结果见表4 由表4可见，口服给药各组小鼠脾淋巴细胞LAK活性在同一效/靶比均较正常对照明显增高（P<0.01），其中以芦笋皂甙的作用最强。 3 讨论 有学者的研究表明，芦笋对实验动物多种可移植性肿瘤具有不同程度的抑制作用。其抑瘤作用机理，有人认为与芦笋内含有丰富的组织蛋白、叶酸、核酸有关，也有人认为芦笋含醛酮较多，且微量元素（Se）含量也较高，可通过电子传递和提高含Se酶活性而发挥抗瘤效层。我们的研究结果表明，芦笋具有促有丝分裂的作用，在体内外均可促进小鼠脾淋巴细胞增殖；口服芦笋及其提取物还可提高给药动物体内NK活性，这对宿主非特异性抗肿瘤免 表4 口服芦笋及其提取物对rIL-2诱导的小鼠脾淋巴细胞LAK活性的影响 Group n LAK activity（%） E：T=40：1 Control 10 46.1±1.91 Asparagus jujce 10 59.4±2.04（1） Polyglucosijde of Asparagus 10 56.1±1.01（1） Saponin of Asparagus 10 72.6±3.27（2） （1）Compared to the control（C），P<0.01； （2）Compared to Asparagus group,P<0.01。 性肿瘤患者体内NK活性水平也较正常人为低，且随不同的临床阶段及治疗效果而消长。因此，我们的研究结果提示，芦笋的抑瘤作用可能是通过提高机体免疫能力，特别是细胞免疫机能来实现的。 LAK细胞为近年来发现的一类淋巴因子激活的杀伤细胞，在体内具有广谱的杀瘤活性，被用于肿瘤的过断免疫治疗，并取得较好的抗瘤效果。但在治疗中须并用大量的rIL-2以维护体内LAK活性，由此而出现一些较为严重的副作用。芦笋及其提取物可提高机体内LAK活性这一结果提示，芦笋可成为肿瘤免疫综合治疗中又一新的配伍成份而应用在防癌治瘤中。它对提高过继免疫治疗效果，降纸副作用将会起到一定的作用。 许多中草药如人参、枸杞等多糖成份对机体免疫机能均有促进作用。为探索芦笋抗瘤有效成份，我们观察并比较了芦笋原汁、多糖及皂甙提取物等不同成份在提高机体非特异性细胞免疫机能中的作用。我们发现，无论芦笋原汁、多糖及皂甙均有促进小鼠脾淋巴细胞淋转、NK活性及LAK活性的作用，在这些作用中，芦笋皂甙的作用明显优于多糖及原汁。推测皂甙的这一强烈作用可能与其直接的细胞毒作用有关。 ——《贵阳医学院学报》，1992，17（4）：250-254 已获的国家药品监督局批准上市的“芦笋胶囊”由中国癌症信息库--全国独家应用销售
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