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芦笋对人外周血自然杀伤细胞活性的影响

http://www.wd999.com 2006-1-19 14:25:47

贵阳医学院病理生理学教研室军事医学科学院放射医学研究所杨勤庄宗杰宁志强王玉芝摘要应用51Cr释放试验研究了中药芦笋对人外周血自然杀伤细胞（NK）活性的影响。结果表明，芦笋汁在适当浓度范围内（3μg/mI—30μg/mI）对NK活性有明显的促进作用（P<0.05）。当与rIL-2联合应用时，可显著提高rIL-2在体外对NK活性的增强作用。芦笋对人外周血NK活性的这种促进作用不仅与剂量有关，而且与机体的免疫状态有关。这一研究结果提示芦笋可成为宿主抗肿瘤防御反应的增强剂应用在防癌治癌中。关键词芦笋自然杀伤细胞淋巴细胞有丝分裂因子芦笋的抗肿瘤作用已见报导，并认为其抗肿癌作用机理与促进T淋巴细胞增殖、提高T细胞功能有关。关于芦笋对自然杀伤细胞活性的影响尚未见报导，为此我们进行以下实验，现将结果报告如下。 1．材料与方法 1．1 芦笋黔园一号，由贵州农科院培植并提供。取其嫩茎，特殊工艺榨汁，浓缩得浓度为33%的芦笋原汁，离心后，经0.22μm混合纤维素酯微孔滤膜除菌备用。 1．2 主要试剂（略）。 1．3 效应细胞准备取成年健康献血者新鲜肝素抗凝血，以淋巴细胞分离液分离单个核淋巴细胞，在含有不同浓度（3μg/ml—300μg/ml）芦笋原汁的15%小牛血清之RPMI—1640中孵育16小时为效应细胞。 1．4 靶细胞培养与标记取传代细胞株K562细胞悬液0.3ml（2×106cells/ml）加入51Cr60μci，37℃温育1h—1.5h，洗涤三次后，计数，制成1×105 cells/ml细胞悬液。 1．5 NK细胞杀伤活性的测定采用51Cr释放试验，将51Cr标记之靶细胞K562，按5×103cells/well置于96孔圆底培养板内，按效∶靶=50∶1加入经芦笋处理的外周血单核淋巴细胞，37℃、5%CO2、饱和湿度下孵育4h，取上清液用r—计数仪测定cpm值。每样本均设三复孔。按下式计数杀伤率：实验组cpm-自然释放cpm 自然杀伤率（%）= ×100 最大释放cpm-自然释放cpm 所有实验自发释放率均低于18%。 2．结果 2．1 不同浓度的芦笋原汁对外周血淋巴细胞（PBL）自杀伤活性的影响。结果见表1。表1 不同浓度芦笋对人外周血自然杀伤细胞活性的影响 Group Doses(μg/ml) NK artivity(X±SD，%) Control — 36.6±4.88 Asparagus 300 37.8±3.78 30 57.1±10.62 3 52.4±2.21 P<0.05 P<0.01 结果表明，高浓度（300μg/ml）的芦笋对NK细胞活性的影响与对照组相比无显著差异（P>0.05），低浓度（30μg/ml）甚至低至（3μg/ml）的芦笋原汁可明显提高人PBL的NK细胞活性，与对照组比较差异极为显著（P<0.01，P<0.005）。 2．2 芦笋对不同免疫水平个体NK细胞活性的影响据不同个体PBL的NK细胞活性水平分低值组（NK活性<35%）与高值组（NK活性>35%），芦笋对这两组不同个体NK活性影响见表2。表2 芦笋对不同免疫水平个体NK细胞活性的影响 Gronp Does(μg/ml) NK activity(X±SD，%) Low immune level high immune level Control — 33.9±1.06 59.5±24.46 Asparagus 30 58.5±3.39 66.9±17.5 P<0.01 结果表明，芦笋对NK细胞活性低值的个体其促NK细胞活性的作用远较高值个体显著（P<0.01）。 2．3 芦笋rIL—2在NK细胞活性增强作用中的协同同时使用不同浓度芦笋（3μg/ml，30μg/ml，300μg/ml）与rIL—2（100u/ml）处理PBL16h，对NK细胞活性的影响结果见表3。表3 不同浓度的芦笋和rIL—2并用对NK细胞活性的影响 Groups Doses NK activity(X±SD，%) rIL—2(μ/ml) Asparagus(μg/ml) Control — — 36.6±4.88 rIL—2 100 53.9±14.05 Combination1 100 300 42.0±9.99 Combination2 100 30 69.1±4.89 Combination3 100 3 67.7±2.1 Compared with control P<0.05 Compared with rIL—2 P<0.05 由表3可见，单独加入rIL—2可明显提高PBL的NK细胞活性。低浓度芦笋原汁（30μg/ml，3μg/ml），与rIL—2合用可使rIL—2对NK细胞活性的促进作用显著提高，较单独用rIL—2对NK细胞活性的促进作用更为明显（P<0.05）。高浓度的芦笋原汁（300μg/ml）则使rIL—2促NK细胞活性的作用受抑制。 3．讨论 Sati等人证实芦笋提取物在体外对人宫颈癌JTC—26细胞、在体内对小鼠F—388白血病细胞具有明显的细胞毒作用。Gorvan等人也证实它可抑制小鼠乳腺癌、胰腺癌和宫颈癌的生长。国内李冬华等人报道芦笋汁对人食道癌Eca—109和小鼠肺腺癌LA—795有明显毒性作用，且使用芦笋胶囊能延缓肺腺癌小鼠存活期。我们前期的研究也证实，芦笋对多种小鼠可移植性肿瘤具有不同程度的抑制作用，因而芦笋作为一种广为食用的蔬菜，其抗癌作用的存在及抗瘤机制的研究更具重要意义。具有大颗粒淋巴细胞（LGL）形态学特征的NK细胞占正常人外周血淋巴细胞的10%—15%，是一类对细菌、病菌及肿瘤细胞具有强大杀伤作用的细胞群体，被认为是宿主实现免疫监护的重要细胞成份。研究观察了芦笋原汁对人外周血NK细胞活性的影响，发现低浓度的芦笋（3μg/ml—30μg/ml）具有较明显的促NK活性作用。进一步的结果表明，芦笋对NK细胞活性的促进作用与机体免疫状态有关。对NK细胞活性低值的个体其促NK细胞活性的作用明显高于高值的个体，说明在适当浓度范围内芦笋能最大程度地激活NK细胞发挥其杀伤活性，Brekhman把这种来源于植物对机体有双向调节作用的物质称为适应原，这种作用称为适应原作用。我们的这些结果提示，芦笋通过提高机体NK细胞活性对机体抗感染及增强机体对肿瘤的发生与发展具有重要的意义。 RIL-2可提高NK细胞活性。本研究也证实，rIL-2可使人外周血NK细胞活性明显提高。更为有趣的是：当芦笋在适当浓度范围内（3μg/ml—30μg/ml）与rIL-2合用，对rIL-2促NK细胞活性的增强作用较单纯应用rIL-2更为明显；而芦笋浓度过高（300μg/ml）时却轻度抑制rIL-2对NK细胞活性增强这一作用。这种抑制现象可能与高浓度芦笋的直接细胞毒作用引起免疫细胞受损有关。近年来，rIL-2及由rIL-2诱生的淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）在肿瘤的过继性免疫治疗中已取得了可喜的成果。但现行的LAK细胞治疗的严重局限及风险在于大剂量rIL-2应用带来的副作用，如何提高过继免疫治疗的效疗，降低rIL-2的副作用，增强rIL-2作用的表达是治疗中的关键问题。芦笋与rIL-2联合应用可明显增强rIL-2促NK细胞活性这一结果提示，芦笋制剂可以成为过继性肿瘤免疫治疗中一个值得注意的配伍成份。 ——《贵阳医学院学报》，1992，17（3）：165-168 已获的国家药品监督局批准上市的“芦笋胶囊”由中国癌症信息库-全国独家应用销售

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