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定量实时荧光PCR技术在肿瘤检测中的应用

http://www.wd999.com 2006-4-5 21:38:36

实时荧光定量PCR技术，真正做到了对PCR模板的精确定量,不仅保持了常规PCR技术的高灵敏性,而且由于特异性荧光探针杂交技术的应用, 使得被检基因的特异性大大提高。血道转移是肿瘤扩散的主要途径之一，对循环血中的微量肿瘤细胞基因表达和一些特异性基因标志产物的检测是肿瘤诊断的一个主要方向。
1995年美国PE公司研制成功具有革命性意义的荧光定量PCR技术，融汇了PCR高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量等优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化，以获得定量的结果，不需要PCR后处理或电泳检测，完全闭管操作（整个过程中仅有加入样品的一次开盖），一举克服了常规PCR技术的诸多难题，为PCR全面进入临床应用打开了成功之门。
荧光定量PCR的过程：从操作上看，荧光定量PCR的过程相当简单，样品经常规处理后，加入到已配制的PCR反映管中，同时设阴、阳性对照和阳性定量梯度对照，放入PCR仪器中，按使用说明书所建议的PCR程序进行循环。反应结束后，电脑通过分析，直接给出定量结果；从PCR反应开始，全过程不需要再打开盖，既简化了操作步骤，又在很大程度上控制了扩增产物污染所导致的假阳性。荧光定量PCR的灵敏度：荧光定量PCR对产物的检测是通过仪器对荧光信号的测定来完成，仪器对光信号的敏感性远远高于肉眼，因此，其灵敏度很高，同时其定量范围很宽，可包括0—1011拷贝/毫升。它的定量准确度为±100%，换而言之，上下最大偏差为一倍。一般来讲临床样本中的病原体数目，为0—1010的不同程度。对此范围，荧光定量PCR相当准确，足以满足临床诊断的要求。荧光定量PCR试剂安全可靠，整个体系中不包含有毒有害物质，对环境的污染很小。
荧光定量PCR显著优点总结如下：
（1）、可以进行准确的定量检测，可适用于基因诊断的各种疾病；
（2）、定量范围极宽，样品无需做梯度稀释；
（3）、特异性更强，克服了假阳性的主要来源；
（4）、操作快速，无需PCR后处理；
（5）、技术简单，易于学习和掌握；
（6）、安全，对操作员和环境都无危害。
（7）、易于进行电脑化操作和数据管理，有利于医院的现代化建设。
实时荧光定量PCR检测肿瘤的有关项目（我科）
CEA mRNA、 AFP mRNA、uPA mRNA、CK19 mRNA、CK20 mRNA、
MDRI mRNA。

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